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细胞培育室

作者:admin 出处:科瓦特发表时间:2016-09-07 11:58:23
 

细胞培育室简介
  细菌培养实验室是微生物实验室里面的配套实验室,细菌培养室用人工方法(使其在合适的温度,湿度,光照度,PH值,洁净度等环境下,使细菌生长繁殖,培养出来的细菌用于研究、鉴定和应用。广泛用于医药研究。
室内要求无菌操纵,要求工作环境和条件必须保证无微生物污染和不受其它有害因素的影响.细胞培养室和设计原则是防止微生物污染和有害因素影响,要求工作环境清洁,空气清新,干燥和无烟尘.细胞培养室的设计原则一般是无菌操纵区设在室内较少走动的内侧,常规操纵和封闭培养于一室,而洗刷消毒在另一室. 与其他一般实验室工作的主要区别在于要求保持无菌操作,避免微生物及其他有害因素的影响。一般标准的细胞培养室应包括配液室、准备室和培养室。三室既相互连接又相对独立,各自完成培养过程中的不同操作。

细胞培育室

细胞实验室可培育的细胞种类
  干细胞培养
•肿瘤细胞的培养 <>
 • 上皮细胞的原代培养 <>
 • 内皮细胞原代培养 <>
 • 神经原细胞原代培养 <>
 • 肌组织原代培养 <>
 • 巨噬细胞原代培养 <>
 • 293细胞培养 <>
 • 细胞的冷冻保存和解冻培养 <>
 • 小鼠胚胎干细胞的培养 <>
 • 小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDC)的培养<>
 • 肺泡II型细胞分离培养 <>         
 • 肝枯否细胞分离培养 <>
 • 原代软骨细胞分离培养 <>
 • 心肌细胞分离培养 <>
• 细胞转染技术
备注:细胞培育室包括以上细胞品类,但不限于以上种类:

胞培养室的温度
    维持培养细胞旺盛生长,必须有恒定而适宜的温度.不同种类的细胞对培养温度要求也不同.人体细胞培养的标准温度为36.5℃±0.5℃,偏离这一温度范围,细胞的正常代谢会受到影响,甚至死亡.培养细胞对低温的耐受力较对高温强,温度上升不超过39℃时,细胞代谢与温度成正比;人体细胞在39-40℃1小时,即能受到一定损伤,但仍有可能恢复;在40-41℃1小时,细胞会普遍受到损伤,仅小半数有可能恢复;41-42℃1小时,细胞受到严重损伤,大部分细胞死亡,个别细胞仍有恢复可能;当温度在43℃以上1小时,细胞全部死亡.相反,温度不低于0℃时,对细胞代谢虽有影响,但并无伤害作用;把细胞放进25-35℃时,细胞仍能生存和生长,但速度减慢;放在4℃数小时后,再回到37℃培养,细胞仍能继续生长.细胞代谢随温度降低而减慢.当温度降至冰点以下时,细胞可因胞质结冰受损而死亡.但是,假如向培养液中加进一定量的冷冻保护剂(二甲亚砜或甘油),可在深低温下如-80℃或-196℃(液氮)长期保存.
 细胞培养室合适的气体环境
    气体是哺乳动物细胞培养生存必须条件之一,所需气体主要有氧气和二氧化碳.氧气参与三羧酸循环,产生供给细胞生长增殖的能量和合成细胞生长所需用的各种成分.开放培养时一般把细胞置于95%空气加5%二氧化碳混合气体环境中.二氧化碳既是细胞代谢产物,也是细胞生长繁殖所需成分,它在细胞培养中的主要作用在于维持培养基的pH值.大多数细胞的适宜pH为7.2-7.4,偏离这一范围对细胞培养将产生有害的影响.但细胞耐酸性比耐碱性大一些,在偏酸环境中更利于细胞生长.但有一些细胞也喜欢偏碱环境中生长,如成纤维细胞最适合pH是7.4-7.6.每种细胞都有其最适pH值.
 
细细胞培养实验室的设置
细胞培养实验室应能进行六方面的工作:无菌操作、孵育、制备、清洗、消毒灭菌处理、储藏。
细胞培育室整体布局图

植物细胞培养实验室设置
 1.基本实验室
1.1 洗涤间   
 根据工作量的大小决定其大小,一般面积控制在30-50m2。在实验室的一侧设置专用的洗涤水槽,用来清洗玻璃器皿。中央实验台还应配置2个水槽,用于清洗小型玻璃器皿。如果工作量大,可以购置一台洗瓶机。准备1-2个洗液缸,专门用于洗涤对洁净度要求很高的玻璃器皿。此外还应配置落水架、干燥箱、柜子、超声波清洗器等。   地面应耐湿并排水良好。 
 
1.2培养基配制间
        面积60平方米左右,配备的主要仪器设备有 :冰箱、天平、微波炉、pH计、培养基分装器、药品柜、器械柜、抽气泵、电炉、各种规格的培养瓶、培养皿、移液管、烧杯、量筒、容量瓶、储藏瓶等。冰箱以体积180-200L为宜,用于储存培养基母液、激素维生素等贵重药品、彩色胶卷、及保存植物材料。天平应有不同感量。 
 
1.3消毒间
      配备实验台、高压灭菌锅、排风灭火设备、细菌过滤设备、干热消毒柜、电炉等。 灭菌锅的选择应根据不同的要求选择不同型号的灭菌锅。一般实验室可选用小型的医用手提式高压灭菌锅,较大的实验室可选用立式自动控制压力和温度的灭菌锅。生产性的实验室可选用大型的卧式灭菌锅。 
    如果没有条件的话,可以将上述工作间合并成一个准备间,要求是设备的安装和排列要合理、房间要宽敞、明亮、透风,地面要便于清洁、防滑。
 1.4无菌操作室
      无菌操作室主要用于实验材料的接种操作,所以又叫接种室。通常由里外两间组成,外间是缓冲间,用于准备工作,还有防止污染的作用。缓冲间的门应该与接种室的门错开,两个门也不要同时开启,以保证无菌室不因开门和人的进出带进杂菌。
    缓冲间内应该设有水槽、实验台、鞋帽架、和柜子、紫外灯。无菌操作室的内壁应当用塑钢板或瓷砖装修,工作人员进入操作间前要穿上消过毒的工作服和拖鞋。 室内应配有超净工作台,紫外灯、解剖镜、各种接种器械等。
   1.5培养室
      为了控制培养室的温度和光照时间及其强度,培养室的房间不要窗户,但应当留一个通气窗,并安上排气扇。室内温度由空调控制,光照由日光灯控制。天花板和内墙***好用塑料钢板装修,地面用水磨石或瓷砖铺设,一般要分两间,一为光照培养室,一为暗培养室。培养室外应有一预备间或走廊。 
培养室应配有培养架、转床、摇床、光照培养箱、生化培养箱、自动控时器等。日光灯一般用40W,固定在培养架的侧面或搁板的下面,每层有两支日光灯,距离在20cm,光照强度为2000-3000lx。 2.辅助实验室  2.1鉴定室       
细胞学鉴定室  其功能是对培养材料进行细胞学鉴定和研究。要求清洁、明亮、干燥,使各种光学仪器不受潮湿和灰尘污染。应配置各种显微镜、照相系统等。    生化分析室在以培养细胞产物为主要目的的实验室中,应建立相应的分析化验实验室,以便于对培养物的有效成分随时进行取样检查。 离心机、酶联免疫检测仪、天平、PCR仪等。 2.2、温 室 用于试管苗的锻炼和移植,为试管苗提供满足生长的适宜环境条件。 常用设备有:温室 、弥雾装置、荫棚、移栽床、钵、盆、基质等. 

细胞培育室走廊

                               普通细胞培养室内走廊

细胞培育室工作区
                                           普通细胞培养室一角
万级层流细胞培育室
                                         万级层流细胞培养室
 
 2.动物细胞培养实验室设置
无菌条件:净化工作室,风淋室,传递窗,高效过滤器,洁净层流罩,生物安全柜,超净工作台,紫外灯,电热干燥箱,滤器,高压灭菌器,抗生素。 
细胞生长条件:纯水蒸馏器,纯水仪,培养板,培养瓶, CO2培养箱,培养基,血清 细胞检测条件:倒置显微镜,酶标仪 ,微孔板震荡器,高速离心机,移液器 。
细胞保存条件:液氮罐 实验室  准备间  缓冲间  培养室  。
实验室的要求
①和缓冲间相连,缓冲间内备消毒服装和鞋,口罩等,入内换上 
②设置1—2台超净工作台 
③室内空气不流通,有适当的光线,清洁,干燥
 ④侧部可设传递窗,用于物品传递 
⑤照明用荧光灯为好,消毒用紫外线灯 
⑥在室内工作时,动作应轻微
 
准备间内设备
①大、小水槽②消毒设备③消毒后的物品和器械保藏柜④烘箱
⑤蒸馏器(包括双蒸,三重蒸馏水)⑥玻璃器皿,培养液等⑦电炉等 
注意: 
①配制溶液要用新鲜的纯水,配制过程避免交叉感染
 ②设备排列紧凑 
③指定一处可暂放不污及有毒物质 准备间设备
CO2培养箱:37度+/-0.5度;能调节温度和CO2浓度
 消毒器:高压锅,蒸汽灭菌锅,干燥消毒箱 
冰箱:4度或-20度家用冰箱,保存一般制剂;-70度保存蛋白制剂 
水质纯化装置:净化水质用于清洗或配制培养液 
另外:显微镜,离心机,酸度计,天平,液氮罐、真空泵等。
 
案例一
名称:某生物学研究所植物细胞实验室
实验室面积:500m2的实验场地,
拥有1个层流的细胞操作间、2个普通培养操作间、1个无菌室、及配套实验室和洗涤消毒室、缓冲房。
  植物细胞实验室平面设计图
案例二:
以下为某干细胞治疗中心万级洁净实验室建设方案
一、施工原则
1、)贯穿国家的方针政策和统一施工验收要求,做到保证工程质量、节约能源、保护环境、安全操作。
2、)万级洁净室施工前必须按照设计图纸施工,并且制定详尽的施工方案和程序
3、)施工所用的所有材料、设备必须符合设计规定并有质量鉴定文件。
 
二、实验室设计依据
 
1、《实验室生物安全通用要求》GB-19489-2004
2、《生物安全实验室建筑技术规范》GB50346-2004
3、《洁净厂房设计规范》(GB50073-2001)
4、《洁净室施工及验收规范》(JGJ71-90)
5、《通风与空调工程施工及验收规范》(GB50243-2000)
6、《采暖与空调调节设计规范》(GBJ114-88)
7、《建筑设计防火规范》(GBJ 16-87)
8、《低压配电装置及线路设计规范》(GBJ54-83)
三、万级干细胞实验室净化通风系统
万级无菌实验室利用送、回风量维持房间压差;送风经初、中、高效过滤后送入室内。(回风比例为80%,新风比例为20%)
3.3干细胞实验室结构
从保温角度考虑实验室的围护及吊顶结构采用厚度为50mm的净化实验室专用聚苯乙烯夹心复合彩钢板(优点:机械强度高,隔热、隔音、防潮性能好、平整光滑、耐腐蚀、易清洁、安装方便)。顶棚及板壁的墙角处和墙与地面、墙与吊顶采用圆弧阴阳过渡并封闭。所有配套铝合金型材均采用优质电泳型材,以防止实验室以后消毒时导致铝材氧化。
3.2万级干细胞实验室净化通风系统
万级无菌实验室利用送、回风量维持房间压差;送风经初、中、高效过滤后送入室内。(回风比例为80%,新风比例为20%)
3.3干细胞实验室结构
从保温角度考虑实验室的围护及吊顶结构采用厚度为50mm的净化实验室专用聚苯乙烯夹心复合彩钢板(优点:机械强度高,隔热、隔音、防潮性能好、平整光滑、耐腐蚀、易清洁、安装方便)。顶棚及板壁的墙角处和墙与地面、墙与吊顶采用圆弧阴阳过渡并封闭。所有配套铝合金型材均采用优质电泳型材,以防止实验室以后消毒时导致铝材氧化。
3.4干细胞实验室照明灯具
实验室照明均采用专用洁净室照明灯具(不锈钢斜边型吸顶式带罩密封灯具)。特点:镜面全内胆,照明度强,不锈钢边框年久不腐蚀,外形美观,密封好、抗干扰、不积尘、易清洁。
3.5干细胞实验室消毒
    实验室消毒采用紫外线灯照射消毒
3.6干细胞实验室气流组织方式
从节能角度考虑实验室系统设计为新风+回风混合系统,采用顶送侧下回的气流组织方式。
3.7干细胞实验室空调系统工程
万级无菌实验室采用风冷直接膨胀式净化专用风管型空调机组,满足实验室夏季、冬季冷热负荷,保持实验室恒温恒湿。
3.8干细胞实验室防气流倒灌系统
实验室新风管上均安装电动密闭阀以防止关机时空气回流。并能封闭消毒。
 
干细胞实验室平面图
    以8m*13m的大小面积为例,建立的干细胞实验室平面图。
 
干细胞培育室平面布局 图
 
科瓦特细胞培养室建设方案
   科瓦特提供实验室整体建筑布局和装修、空气调节、给排水、气体供应、电气设计、集中控制、安防、施工工艺、检测、培训等多方面内容。科瓦特实验室可根据客户要求设计、施工,提供一站式实验室整体供应服务!


推荐方案:
动物细胞实验室设计               植物细胞实验室设计方案

              动物细胞实验室设计                                                          植物细胞实验室设计

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